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Master Thesis

Validation d'une technique de PCR en temps réel pour la détection d'ADN de Toxoplasma gondii dans le liquide amniotique et demande d'autorisation auprès de l'Agence Régionale de Santé pour le diagnostic prénatal de la toxoplasmose congénitale au CHU de Bordeaux

Résumé : Toxoplasma gondii (T.gondii) est le deuxième agent responsable d’infection congénitale : la transmission transplacentaire du parasite peut être à l’origine de mort fœtale in utero et de lésions post-natales, parfois sévères, principalement cérébrales ou oculaires. Les pouvoirs publics remettent en question le programme de prévention de la toxoplasmose congénitale établi en 1978, basé sur le dépistage et le suivi sérologique des femmes enceintes séronégatives. En cas de primoinfection pendant la grossesse, la recherche directe du protozoaire dans le liquide amniotique permet d’affirmer la toxoplasmose congénitale. La PCR (Polymerase Chain Reaction) est aujourd’hui la méthode diagnostique de choix. L’objectif principal de ce travail était de valider une technique de PCR en temps réel pour la détection d’ADN de T. gondii dans le liquide amniotique, selon les exigences de la norme NF EN ISO 15189 relative aux laboratoires de Biologie Médicale. Le kit commercial TIB MOLBIOL utilisant la technologie FRET (Fluorescent Resonance Energy Transfer), ciblant la séquence répétée REP 529 a été utilisé. L’extraction de l’ADN a été automatisée sur le MagNA Pure 96® et l’amplification validée sur le Light cycler 2.0®. Un contrôle de qualité interne permet de contrôler le processus d'extraction et de détecter une inhibition de la PCR. Les performances de la technique sont satisfaisantes en termes de sensibilité, spécificité, robustesse et de contrôle de la contamination. La limite de détection a été évaluée à 1 toxoplasme par millilitre de liquide amniotique. L’autre objectif a été de constituer et de déposer le dossier de demande d’autorisation pour le diagnostic prénatal de la toxoplasmose congénitale au CHU de Bordeaux auprès de l’Agence Régionale de Santé d’Aquitaine.
Document type :
Master Thesis
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https://dumas.ccsd.cnrs.fr/dumas-01081649
Contributor : Bu Carreire Université de Bordeaux <>
Submitted on : Monday, November 10, 2014 - 1:58:07 PM
Last modification on : Wednesday, August 23, 2017 - 4:29:26 PM
Long-term archiving on: : Wednesday, February 11, 2015 - 3:31:23 PM

Identifiers

  • HAL Id : dumas-01081649, version 1

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Citation

Simon Pichard. Validation d'une technique de PCR en temps réel pour la détection d'ADN de Toxoplasma gondii dans le liquide amniotique et demande d'autorisation auprès de l'Agence Régionale de Santé pour le diagnostic prénatal de la toxoplasmose congénitale au CHU de Bordeaux. Médecine humaine et pathologie. 2014. ⟨dumas-01081649⟩

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