Analysis of a Tyrosine-and Lysine-Rich Fusion Protein Engineered for the Production of Cell Wall-Bound Recombinant Proteins - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2013

Analysis of a Tyrosine-and Lysine-Rich Fusion Protein Engineered for the Production of Cell Wall-Bound Recombinant Proteins

Analyse d'une protéine de fusion utilisant la TLRP (Protéine Riche en Tyrosine et en Lysine) pour produire des protéines recombinantes en les adressant à la paroi cellulaire

Nils Saillard
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Résumé

C5a and IL6 are small proteins that are already industrially produced for pharmaceutical purposes by microbial fermentation. It was shown that producing them in stably transformed tobacco plants was possible as well. Going further, a new construct genetic construct addressing those proteins to the apoplast to bind and store them in the cell wall was made. This system was achieved using a fusion protein which included the TLRP (Tyrosine- and Lysine- Rich Protein). The purpose of this construct was to ease the purification process and reduce its cost. The yields and the actual localizations of the recombinant proteins that this technique could produce were then investigated in order to know if this system was working efficiently. Different lines, tissues and cellular localizations were investigated to find out the best that could be achieved out of this system. Some of the recombinant protein could, as expected, be recovered from the cell wall but no more than 50% of the whole production as most of the collected recombinant proteins remained free in the apoplast. The overall production of those plants was anyway low. The maximum yield of IL6 extracted from the cell wall being around 1 pg/mg of fresh weight for young leaves, which is the most promising tissue analyzed. A new construct using EGFP was as well prepared in order to further analyze this system
C5a et IL6 sont de petites protéines déjà produites à l’échelle industrielle par fermentation microbienne, ceci à des fins pharmaceutiques. Il a déjà été démontré qu’il était également possible de faire produire ces protéines par des lignées de tabac génétiquement transformées. Une nouvelle construction génétique permettant de les stocker dans la paroi cellulaire a été mise au point, et ce dans le but de faciliter le processus de purification et ainsi réduire les coûts de production de ces protéines. Une telle construction fut obtenue en réalisant une protéine de fusion entre l’IL6 ou le C5a et un protéine pariétale : la TLRP (Protéine Riche en Tyrosine et en Lysine). Une fois cette construction intégrée à une lignée de tabac, les rendements potentiels de ces plantes, ainsi que la localisation subcellulaire des protéines recombinantes produites par cette construction furent étudiées en analysant différentes lignées, tissus et fractions cellulaires de ces plantes. Moins de 50% des protéines recombinantes extraites de ces plantes purent être isolées à partir de leur paroi. De plus les quantités de protéines recombinantes globalement produites par ces plantes sont relativement faibles avec un rendement en protéines isolées à partir de la paroi de leurs jeunes feuilles qui atteint environ 1 pg d’IL6 par mg de poids frais seulement. Une tentative de créer une construction utilisant la EGFP afin de réaliser une analyse plus complète de ce système de production fut également explorée mais un phénomène de délétion lors du clonage empêcha sa réalisation.
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Dates et versions

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  • HAL Id : dumas-01088584 , version 1

Citer

Nils Saillard. Analysis of a Tyrosine-and Lysine-Rich Fusion Protein Engineered for the Production of Cell Wall-Bound Recombinant Proteins. Agricultural sciences. 2013. ⟨dumas-01088584⟩
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