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Master Thesis

Quantification de transcrit par PCR numérique : application au dosage des transcrits SMN pleine longueur dans le contexte de l’amyotrophie spinale proximale

Résumé : L'amyotrophie spinale proximale (SMA) une maladie neuromusculaire d'origine génétique, de sévérité variable. La SMA résulte d'une inactivation homozygote du gène SMN1. Le principal gène modificateur de cette maladie est le gène SMN2 qui possède une forte homologie avec le gène SMN1. Une des variations qui le différencie du gène SMN1 est responsable d'un épissage alternatif du pré-ARNm. Bien que le transcrit court soit majoritaire, le gène SMN2 code également pour un transcrit pleine longueur, similaire au transcrit issu du gène SMN1. Le nombre de copies du gène SMN2 étant variable, plus il est important, plus la quantité de transcrit pleine longueur est élevée, et, moins le phénotype est sévère. OBJECTIFS : Les objectifs sont le développement d'une nouvelle méthode de quantification du transcrit SMN pleine longueur et la détermination de la quantité minimale de transcrit nécessaire pour ne pas exprimer la maladie. MATÉRIEL ET MÉTHODE : La quantification du transcrit SMN pleine longueur par PCR numérique a été réalisée sur 20 échantillons d'ARN. Parmi ces 20 échantillons, 10 sont extrait à partir du sang de patients présentant 4 copies du gène SMN2, la plus grande quantité de gène SMN2 retrouvée chez les patients et 10 à partir d'individus sains présentant 1 copie du gène SMN1 et 0 copie du gène SMN2, la plus faible quantité de gènes SMN pouvant être retrouvée dans la population générale. RÉSULTATS : La concentration relative moyenne de transcrit SMN pleine longueur est de 0,54 dans le groupe patient et de 0,38 dans le groupe témoin. DISCUSSION : La quantité de transcrit SMN pleine longueur est plus importante dans le groupe des patients que dans le groupe des contrôles suggérant une différence de production de protéine par le transcrit qu'il soit issu du gène SMN1, ou, SMN2. CONCLUSION : Nous avons développé et validé une méthode de quantification du transcrit SMN pleine longueur par PCR numérique. Les résultats surprenants que nous observons soulèvent des questions importantes pour la compréhension des bases moléculaires de la SMA.
Document type :
Master Thesis
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https://dumas.ccsd.cnrs.fr/dumas-01235095
Contributor : Bibliothèque Santé <>
Submitted on : Friday, November 27, 2015 - 6:08:09 PM
Last modification on : Monday, December 2, 2019 - 10:24:01 AM
Long-term archiving on: : Saturday, April 29, 2017 - 1:43:13 AM

Identifiers

  • HAL Id : dumas-01235095, version 1

Citation

Yoann Vial. Quantification de transcrit par PCR numérique : application au dosage des transcrits SMN pleine longueur dans le contexte de l’amyotrophie spinale proximale. Sciences pharmaceutiques. 2015. ⟨dumas-01235095⟩

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