Développement et validation d’une méthode de dosage de l’Entécavir : application pour l’étude de l’observance au traitement chez des patients chroniquement infectés par le virus de l’hépatite B - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2015

Quantitation of entecavir in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry: Application for the study of treatment adherence in patients chronically infected with hepatitis B

Développement et validation d’une méthode de dosage de l’Entécavir : application pour l’étude de l’observance au traitement chez des patients chroniquement infectés par le virus de l’hépatite B

Résumé

Entecavir is a nucleoside analog, available for the treatment of chronic hepatitis B. We report here a method suitable for the quantitation of entecavir in plasma of chronically infected HBV patients. This method couples a Solid-Phase Extraction (SPE) preparation and a high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. We used Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) columns to improve retention. Our results show good accuracy and precision, for within-day (bias between 3.83 and 7.45 %, CV between 0.67 and 3.83 % respectively) and for between-day (bias between 4.57 and 5.79 %, CV between 3.06 and 6.41 % respectively). The lower and upper limit of quantification were 50 and 10 000 ng. Calibration was found linear over the concentration range of 50.0 to 10 000 ng.L-1 and there was no inter-sample carryover . So performance of this method is in accordance with international guidelines and is compatible with daily laboratory practice and clinical trials. On 80 plasma samples from patients treated with entecavir, only 6 were non-adherent patients. A trend (p = 0.06) to the decrease in median trough concentrations was observed with non-adherent patients (391 ng / L) compared to adherent patients (580 ng / L). No patient had plasma concentration of Entecavir undetectable. In view of the long half-life of Entecavir (about 24 hours), these results suggest that some patients identified by our criteria as "non-observant" are so only occasionally. This work also enabled the description of the pharmacokinetic profile of entecavir in patients with hepatitis B and treated chronically, and the determination of a maximum concentration (Cmax) of 3182 ng / L.
L’Entécavir est un analogue nucléosidique utilisé dans le traitement de l’hépatite chronique B, l’un des principaux problèmes de santé publique. Nous avons développé une méthode analytique de quantification de l’Entécavir plasmatique, comprenant une première étape d’extraction en phase solide, suivie d’un dosage par chromatographie liquide haute performance HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) couplée à la spectrométrie de masse en tandem. Principales performances de notre méthode de dosage : Répétabilité : Coefficients de Variation (CV) entre 0.67 et 3.83% ; Reproductibilité : CV entre 3.06 et 6.41% ; Biais de justesse : entre 3.83 et 7.45% ; Pourcentage de contamination : 0.01% ; Limites de quantification et de linéarité : entre 50 et 10 000 ng/L. Cette méthode répond donc aux objectifs de performances selon la norme internationale ISO 15189. Sur 80 échantillons plasmatiques de patients traités par Entécavir, seulement 6 concernaient des patients non-observants. Une tendance (p=0.06) à la diminution des concentrations résiduelles médianes était observée chez les patients non-observants (391 ng/L) par rapport aux patients observants (580 ng/L). Aucun patient n’avait une concentration plasmatique d’Entécavir indétectable. Au regard de la longue demi-vie de l’Entécavir (environ 24h), ces résultats suggèrent que certains patients identifiés selon nos critères comme « non-observants » ne le sont que ponctuellement. Ce travail a aussi permis la description du profil pharmacocinétique de l’Entécavir chez les patients atteints de l’hépatite B et traités de façon chronique, ainsi que la détermination d’une concentration maximale (Cmax) moyenne de 3182 ng/L.
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Dates et versions

dumas-01254609 , version 1 (12-01-2016)

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Citer

Guillaume Chovelon. Développement et validation d’une méthode de dosage de l’Entécavir : application pour l’étude de l’observance au traitement chez des patients chroniquement infectés par le virus de l’hépatite B. Sciences pharmaceutiques. 2015. ⟨dumas-01254609⟩
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