Construction d'une souche de Candida lusitaniae génétiquement modifiée pour l'étude des mutations de résistance aux échinocandines caractérisées chez des isolats cliniques - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2016

Construction of a genetically modified Candida lusitaniae strain for studying clinical echinocandin resistance

Construction d'une souche de Candida lusitaniae génétiquement modifiée pour l'étude des mutations de résistance aux échinocandines caractérisées chez des isolats cliniques

Résumé

Invasive fungal infection caused by Candida species are constantly growing over the last 20 years and are associated with high mortality rate. Prompt and accurate diagnosis is essential to initiate appropriate antifungal therapy. Because of the lack of sensitivity of blood cultures and their long delay of positivity, antifungals are often started without evidence of disease. Echinocandin drugs are widely used as empirical therapy of invasive candidiasis. Echinocandins target the fungal cell wall by blocking β-1,3-D-glucan synthase. In recent years, clinical failures due to the acquisition of point mutations in the FKS gene (encoding subunit of β-(1,3)-D-glucan synthase) have been reported. Most of the mutations occur in highly conserved regions called “hot spots” (HS). In Bordeaux Hospital University Center, over a 26-month period, 9 clinical isolates with FKS mutations have been identified. These resistant isolates have been charac terized by phenotypic and genotypic analysis. The high size of the FKS1 gene (around 5,5 kb) limits the analysis of its expression. Therefore, most studies only focused on the HS regions, using Saccharomyces cerevisiae as model. We developed a new model in Candida lusitaniae (a CTG-clade Candida species) for the homologous expression of full-length mutated FKS1 alleles. We characterized 3 mutations in the HS regions and studied the effect of the combination of 2 mutations on the resistance profile. The yeast model described in this work could be used to investigate the impact of FKS mutations in the interactions between Candida spp and phagocytes, with or without echinocandin.
Les infections fongiques invasives à Candida spp en augmentation ces 20 dernières années sont associées à une mortalité élevée. Un diagnostic fiable et rapide est indispensable pour instaurer un traitement antifongique approprié. Devant la faible sensibilité des hémocultures et leur positivité tardive, le traitement antifongique est souvent instauré avant toute documentation microbiologique de l’infection. Les échinocandines sont les molécules les plus largement utilisées dans le traitement empirique et curatif des candidoses invasives. Elles agissent sur la paroi fongique en inhibant la β-1,3-D-glucane synthétase. Ces dernières années, des échecs cliniques et thérapeutiques liés à l’acquisition de mutations ponctuelles dans les gènes FKS, qui codent pour la sous-unité catalytique de la β-1,3-D-glucane synthétase, ont été décrits. La majorité de ces mutations apparaissent dans deux régions très cons ervées, appelées « Hot-Spots » (HS). Au Centre Hospitalier Universitaire de Bordeaux, sur une période de 26 mois, 9 isolats cliniques de Candida spp présentant une mutation dans les gènes FKS ont été identifiés. Ces souches résistantes ont été caractérisées par des méthodes phénotypique et génotypique. La grande taille du gène FKS, environ 5,5 kb, complique l’analyse des allèles mutés. Celle-ci, réalisée la plupart du temps chez Saccharomyces cerevisiae, se limite donc le plus souvent aux régions HS. Nous avons donc construit une souche de Candida lusitaniae (clade CTG des Candida) génétiquement modifiée pour l’étude d’allèles FKS complets. Nous avons caractérisé 3 mutations localisées dans les régions HS et étudié l’effet de l’association de deux mutations sur le phénotype de résistance. Le modèle mis au point dans ce travail permet d’étudier également l’impact des mutations dans l’interaction in vitro entre les Candida spp (mutés ou non) et les macrophages, en présence ou non d’échinocandine.
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Dates et versions

dumas-01411850 , version 1 (07-12-2016)

Identifiants

  • HAL Id : dumas-01411850 , version 1

Citer

Célia Couzigou. Construction d'une souche de Candida lusitaniae génétiquement modifiée pour l'étude des mutations de résistance aux échinocandines caractérisées chez des isolats cliniques. Sciences pharmaceutiques. 2016. ⟨dumas-01411850⟩
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