MiR-483-5p and miR-139-5p promote invasion and tumorigenicity of adrenocortical carcinoma cells - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2015

MiR-483-5p and miR-139-5p promote invasion and tumorigenicity of adrenocortical carcinoma cells

MiR-483-5p et miR-139-5p contribuent à l’invasivité et la tumorigénicité du carcinome corticosurrénalien

Résumé

Background. MicroRNAs have emerged as potential biomarkers for diagnosis and prognosis of adrenocortical tumors. We have previously shown that miR-483-5p and miR-139-5p were upregulated in adrenocortical carcinomas (ACC) (Chabre et al. 2013). However, the role of these microRNAs in the pathogenesis of ACC is still unknown. Objective. Our aim was to identify target genes of miR-483-5p and miR-139-5p in ACC and to investigate their contribution to adrenocortical tumorigenesis. Methods. Target prediction was performed using miRWalk and TargetScan databases combined with the previously published transcriptome of adrenocortical tumors (de Reyniès et al. 2009). Tumor miR-483-5p and miR-139-5p levels were measured by RT-qPCR in 28 patients from the French biobank COMETE and correlated with the expression of their putative targets. The 3’-untranslated regions of putative target genes were cloned into pMiR-Luciferase vectors to evaluate miRNAmRNA interactions. The role of miR-483-5p or miR-139-5p in the malignant phenotype of NCIH295R cells was investigated using miRNA inhibitors. Results. We identified NDRG2 (N-Myc Downstream-Regulated Gene 2) and NDRG4 as targets of miR-483-5p and miR-139-5p, respectively. In ACC, expression of NDRG2 and NDRG4 was inversely correlated with miR-483-5p and miR-139-5p levels. Downregulation of miR-483-5p or miR-139-5p in NCI-H295R cells induced an increase of NDRG2 or NDRG4 mRNAs. Moreover, NDRG2 and NDRG4 transcripts were negatively regulated via specific miRNA target sites. Finally, silencing miR-483-5p or miR-139-5p did not affect proliferation or apoptosis of NCI-H295R cells but inhibited their anchorage-independent growth and invasion capacities. Conclusion. Our data indicate for the first time that repression of NDRG2 and NDRG4 tumor suppressor genes by overexpressed miR-483-5p and miR-139-5p might contribute to ACC aggressiveness.
Les microARNs ont émergé comme bio-marqueurs potentiels pour le diagnostic et le pronostic des tumeurs corticosurrénaliennes (TCS). Notre équipe a montré que miR-483-5p et miR-139-5p sont sur-exprimés dans les carcinomes corticosurrénaliens (CCS) (Chabre et al. 2013). Toutefois, le rôle de ces miRNAs dans la pathogenèse des CCS est encore inconnu. Objectif. L'objectif était d'identifier les gènes cibles de miR-483-5p et miR-139-5p dans le CCS et d'étudier leur contribution dans la tumorigenèse corticosurrénalienne. Méthodes. La prédiction des cibles a été réalisée en utilisant les bases de données miRWalk et TargetScan, combinées avec le profil d'expression génique des tumeurs corticosurrénaliennes, publié précédemment (de Reyniès et al. 2009). Le niveau d’expression tumoral de miR-483-5p et miR-139-5p a été mesuré par RT-qPCR dans une cohorte de 28 patients issus de la banque du réseau national COMETE (COrtico- MEdullo Tumeurs Endocrines), et corrélé au niveau d’expression des gènes cibles hypothétiques. La région 3’-non traduite (3’UTR) des gènes cibles a été clonée en aval d’un gène rapporteur Luciferase pour évaluer l’interaction microARN-ARN messager. Le rôle des deux microARNs dans le phénotype malin de la lignée cellulaire NCI- H295R a été étudié par transfection d’inhibiteurs de microARNs. Résultats. Nous avons identifié NDRG2 (N-Myc Downstream-Regulated Gene 2) et NDRG4 comme cibles de miR-483-5p et miR-139-5p, respectivement. L'expression de NDRG2 et NDRG4 dans les CCS était inversement corrélée à l’expression de miR-483-5p et miR-139-5p, respectivement. L’inhibition de miR-483-5p et miR-139-5p dans les cellules NCI-H295R entraîne une augmentation du niveau d’ARNm de NDRG2 et NDRG4. De plus, les transcrits de NDRG2 et NDRG4 sont régulés négativement via un site d’interaction spécifique avec les microARNs. Enfin, l’inhibition de miR- 483-5p et de miR-139-5p n'a pas affecté la prolifération ou l'apoptose des cellules NCI- H295R, mais a inhibé leur caractère invasif et leur croissance en gel d’agar sans ancrage cellulaire. Conclusion. Nos données suggèrent que miR-483-5p et miR-139-5p contribuent à l’agressivité des CCS en réprimant l’expression de deux gènes suppresseurs de tumeurs, NDRG2 et NDRG4.
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Dates et versions

dumas-01518315 , version 1 (04-05-2017)

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Citer

Claire Agosta. MiR-483-5p and miR-139-5p promote invasion and tumorigenicity of adrenocortical carcinoma cells. Human health and pathology. 2015. ⟨dumas-01518315⟩
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