Recherche d’un nouveau marqueur de résistance aux fluoroquinolones chez F. tularensis - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2017

Recherche d’un nouveau marqueur de résistance aux fluoroquinolones chez F. tularensis

Résumé

Francisella tularensis, is a highly infectious Gram negative pathogen, causing the severe disease tularemia. Fluoroquinolones (FQ) represent the best alternative for the oral therapy of this disease. Over the past decade, the overuse of these antibiotics led to an increased prevalence of resistant bacteria and this is a major public-health problem. As a consequence, a better understanding of the mechanisms of FQ resistance and the identification of new targets is of high importance. Previous results obtained in the lab showed that the in vitro exposure of the LVS strain of F. tularensis to FQ generate highly resistant strains, among which 80% are sharing mutations on fupA/B. The aim of my thesis was thus to determine whether the FupA/B protein is involved in FQ resistance. The evaluation of MIC to ciprofloxacin of the evolved FQ-resistant mutants complemented or not with fupA/B confirmed that a FupA/B expression defect was indeed correlated with FQ resistance. These results were confirmed using a LVSΔfupA/B strain constructed in this work. In clinical strains, FupA/B is encoded by two distinct genes, fupA and fupB. The production of a specific antibody targeting FupA allowed to check expression of this protein from clinical isolates. We also looked for mutations within the corresponding gene from DNA extracted from samples of infected patients with treatment failure. To date, our results have not revealed any altered expression of FupA but several perspectives are envisaged including biofilm analyses.
Francisella tularensis est une bactérie à Gram négatif, hautement pathogène, responsable de la tularémie, pathologie pour laquelle les fluoroquinolones (FQ) sont prescrites en première intention. L’utilisation excessive de ces antibiotiques est à l’origine d’une augmentation inquiétante de la prévalence des bactéries résistantes. De ce fait, la compréhension des mécanismes d’acquisitions de résistances aux FQ et l’identification de nouvelles cibles est d’un intérêt majeur. Des résultats préliminaires ont montré qu’in vitro, l’exposition aux FQ de la souche LVS de F. tularensis favorisait la génération de souches hautement résistantes dont 80% portent des mutations de fupA/B. L’objectif de mon travail de Thèse d’Exercice a donc été de caractériser le rôle de la protéine codée par ce gène dans la résistance aux FQ. L’évaluation de la CMI à la ciprofloxacine des mutants d’évolution résistants aux FQ complémentés ou non par fupA/B à confirmer qu’un défaut d’expression de FupA/B était associé à la résistance aux FQ. Ces résultats ont été confirmés avec une souche LVSΔfupA/B construite dans ce projet. Dans les souches cliniques, cette protéine est codée par deux gènes distincts, fupA et fupB. La production d’un anticorps spécifique a permis d’analyser l’expression de FupA dans des isolats cliniques. Nous avons également recherché des mutations du gène à partir d’ADN extrait de prélevements de patients infectés en échec thérapeutique. A ce jour, nos résulats n’ont pas révélé d’altération de l’expression de FupA mais un certain nombre de perspectives sont envisagées, dont l’analyse de biofilms.
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Dates et versions

dumas-01525260 , version 1 (24-05-2017)

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Citer

Claire Siebert. Recherche d’un nouveau marqueur de résistance aux fluoroquinolones chez F. tularensis. Sciences pharmaceutiques. 2017. ⟨dumas-01525260⟩
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