Anomalies Morphologiques Multiples des Flagelles chez des patients infertiles : évaluation du pronostic de l’ICSI chez les patients mutés dans le gène DNAH1 et caractérisation de nouveaux gènes - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2016

Multiple Morphological Abnormalities of the sperm Flagellum in infertile men: ICSIs' pronostic evaluation in a population of DNAH1 mutated patients and caracterization of new genes

Anomalies Morphologiques Multiples des Flagelles chez des patients infertiles : évaluation du pronostic de l’ICSI chez les patients mutés dans le gène DNAH1 et caractérisation de nouveaux gènes

Résumé

Male infertility affects more than 20 million men worldwide and represents a major public health issue. Although it involves many factors, male infertility has a significant genetic component. My work consisted in characterizing a novel gene in the phenotype of Multiple Morpholgical Abnormalities of the Flagellum (MMAF), a teratozoospermia responsible for severe malformations of the sperm flagellum. The exome sequencing of a cohort of 73 infertile patients with MMAF has allowed the identification of homozygous truncating mutations in the gene CFAP43 in 5 patients. The study of the transcripts by RT-qPCR showed predominant expression in testis. The sperm analysis by electron microscopy and immunofluorescence as well as knockout mouse production by the technique of CRISPR / case.9 was used to demonstrate the involvement of CFAP43 in the MMAF phenotype of our patients. In addition, one of the therapeutical options for these patients MMAF is to resort to medically assisted reproduction technology (ART) including in intracytoplasmic sperm injection (ICSI). Therefore, the second aim of my thesis was to verify whether mutations in the genes responsible for this phenotype did not influence the chances of success of ICSI in these patients. We retrospectively analyzed the ICSI success rate in 6 patients MMAF mutated gene in DNAH1 and assessed the quality of chromatin gametes. In conclusion, we observed a good pregnancy rate (50%), good quality and low nuclear aneuploidy justifying the medical management of these couples by ICSI.
L’infertilité masculine concerne plus de 20 millions d’hommes à travers le monde et représente un véritable enjeu de santé publique. Bien que multifactorielle, l’infertilité masculine a une composante génétique importante. Mon travail a consisté à caractériser un nouveau gène dans le phénotype de Malformation Multiple des Flagelles (MMAF), une tératozoospermie responsable de malformations sévères du flagelle du spermatozoïde. Le séquençage exomique d’une cohorte de 73 patients infertiles avec MMAF a permis d’identifier des mutations tronquantes homozygotes dans le gène CFAP43 chez 5 patients. L’étude des transcrits par RT-qPCR a démontré une expression majoritaire dans le testicule. Les analyses par microscopie électronique et immunofluorescence des spermatozoïdes de même que la production de souris KO par la technique de CRISPR/Cas9 ont permis de confirmer formellement l’implication du gène CFAP43 dans le phénotype MMAF des patients. Par ailleurs, une des options thérapeutiques chez ces patients MMAF est de recourir à des techniques de procréation médicalement assistée (PMA) et notamment à l'injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI). Le second objectif de ma thèse a été de vérifier si les mutations dans les gènes responsables de ce phénotype n’entravaient pas les chances de réussite de l’ICSI chez ces patients. Nous avons analysé rétrospectivement le taux de réussite de l'ICSI chez 6 patients MMAF mutés dans le gène DNAH1 et évalué la qualité de la chromatine de leurs gamètes. Au final, on note un bon taux de grossesses (50%), une bonne qualité nucléaire et un faible taux d'aneuploïdie justifiant la prise en charge médicale par ICSI de ces couples.
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dumas-01526332 , version 1 (23-05-2017)

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Citer

Clémentine Wambergue Legrand. Anomalies Morphologiques Multiples des Flagelles chez des patients infertiles : évaluation du pronostic de l’ICSI chez les patients mutés dans le gène DNAH1 et caractérisation de nouveaux gènes. Médecine humaine et pathologie. 2016. ⟨dumas-01526332⟩
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