Alternative à la thérapie génique additive par utilisation du système CRISPR-Cas9 pour la correction génique des maladies héréditaires du globule rouge

Résumé : Introduction : la Porphyrie érythropoïétique congénitale (PEC) est une maladie autosomique récessive sévère dont la mutation la plus fréquente est la c.217T>C sur l’exon 4 du gène UROS (p.C73R). Seule la thérapie cellulaire par greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques (CSH) constitue un traitement efficace pour la PEC à ce jour. La preuve d’une correction de cellules malades par des vecteurs lentiviraux intégratifs dans des souris PEC a été faite par thérapie génique additive « ex vivo » mais le principal risque reste la mutagénèse insertionnelle. Notre objectif est d’évaluer la faisabilité d’une correction génique dans la PEC, par réparation dirigée par homologie (HDR), efficace et définitive, grâce à la technologie CRISPR-Cas9 non intégrative et transitoire. Méthodes : d’abord, nous avons mis au point la technique de transfection par nucléofection dans des cellules HEK, et utilisé l’électrophorèse capillaire (quantitative) et du séquençage Sanger (qualitatif) comme outils pour évaluer l’édition du gène UROS. Résultats : nous avons démontré l’importance de la concentration en oligonucléotide donneur simple brin et créé une lignée PEC que vous avons ensuite corrigée par réparation dirigée par homologie. Puis, nous avons établi la preuve de principe de l’efficacité de ce système dans des cellules primaires par édition de cellules souches hématopoïétiques normales et la correction de fibroblastes déficients PEC. Conclusion : il nous reste à confirmer que le système est bien transitoire et que cette technique peut être utile pour une maladie hématologique héréditaire plus répandue comme la drépanocytose.
Type de document :
Mémoires
Médecine humaine et pathologie. 2017
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Soumis le : vendredi 21 juillet 2017 - 17:25:33
Dernière modification le : jeudi 26 octobre 2017 - 01:13:02

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Julian Boutin. Alternative à la thérapie génique additive par utilisation du système CRISPR-Cas9 pour la correction génique des maladies héréditaires du globule rouge. Médecine humaine et pathologie. 2017. 〈dumas-01567122〉

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