Mise au point, validation et application clinique d'une technique analytique du dosage des acides époxyeicosatriénoïques et dihydroxyeicosatriénoïques par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem

Résumé : Les acides époxyeicosatriénoïques (EETs) sont des médiateurs lipidiques vasodilatateurs métabolisés par l’époxyde hydrolase soluble (sEH) en acides dihydroxyeicosatriénoïques (DHETs). Nous avons développé une méthode analytique permettant leur quantification dans des prélèvements plasmatiques humains avant et après stimulation endothéliale.
14 volontaires sains et 5 volontaires hypertendus ont été prélevés avant et après stimulation endothéliale par chauffage cutané distal induisant une dilatation débit-dépendante de l’artère radiale. Les lipides du plasma ont été extraits par une méthode de Bligh et Dyer en milieu acide et saponifiés afin de libérer les EETs et DHETs estérifiés aux phospholipides. Une seconde extraction liquide-liquide est réalisée afin de concentrer l’échantillon et les échantillons sont injectés dans le système après reconstitution dans du méthanol.
Nous sommes parvenus grâce à cette méthode à quantifier les 8,9-, 11,12-, 14,15-EET, 8,9-, 11,12- et 14,15-DHET. Le 5,6- EET, dû à son instabilité chimique n’a pas pu être détecté dans les échantillons. La limite de quantification est de 0,25 ng/mL pour les DHETs et de 0,50 ng/mL pour les EETs. L’étude de la répétabilité et de la reproductibilité a permis de mettre en évidence des coefficient de variations entre 1,6 et 13,2 %.
Le chauffage cutané distal induit une augmentation similaire des concentrations plasmatiques des différents régioisomères d’EETs et de DHETs chez les volontaires sains mais pas chez les patients hypertendus.
Nous avons ainsi validé une technique analytique du dosage des EETs et des DHETs dans le plasma humain et démontré son intérêt dans l’étude de la fonction endothéliale.
Type de document :
Mémoires
Sciences pharmaceutiques. 2017
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Soumis le : vendredi 8 décembre 2017 - 09:35:56
Dernière modification le : mardi 5 juin 2018 - 10:14:34

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Thomas Duflot. Mise au point, validation et application clinique d'une technique analytique du dosage des acides époxyeicosatriénoïques et dihydroxyeicosatriénoïques par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem. Sciences pharmaceutiques. 2017. 〈dumas-01656545〉

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