Modification génétique des facteurs de transcription chez Phaeodactylum tricornutum - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2019

Genetic modification of transcription factors in Phaeodactylum tricornutum

Modification génétique des facteurs de transcription chez Phaeodactylum tricornutum

Romain Perdoux
  • Fonction : Auteur

Résumé

Microalgae are organisms of interest for biofuel production because under stress conditions they produce triglycerides that can be transformed into biodiesel or biokerosene. However, producing biofuels from microalgae is still a laboratory experiment, particularly because of the excessively high production costs. My internship is part of a research project that consists of genetically modifying the microalgae Phaeodactylum tricornutum. This includes modifying it by over-expressing, underexpressing or inactivating genes encoding transcription factors (TFs) potentially involved in lipid production. The purpose of this internship was to: 1) select TFs with marked differential expression under nitrogen stress conditions; 2) construct recombinant plasmids for these candidates using different genetic recombination methods (overexpression, silencing and knock-out (KO)); 3) perform transformations by electroporation and bacterial conjugation. Analysis of the RNA sequencing data revealed 7 candidates from 5 families (aureochrome, CCCH, HSF, MYB and TAZ). Two plasmid constructions for over- and under-expression methods have been successfully realized and the microalgae transformed by electroporation. The results are not yet available. Plasmids for the KO method were constructed by "Golden Gate" and were used in the conjugation transformation technique. The results indicate the presence of zeocin-resistant Pt colonies on petri dishes, confirming the presence of the recombinant plasmid PtPuc3-diaCas9 in the microalgae. Biochemical analyses of mutants under different conditions are now required.
Les microalgues sont des organismes d’intérêt pour la production de biocarburants car en condition de stress, elles produisent des triglycérides qui peuvent être transformés en biodiesel ou biokérosène. Fabriquer des biocarburants à partir de microalgues relève cependant encore de l’expérience de laboratoire, notamment en raison des coûts de production beaucoup trop élevés. Mon stage s’insère dans un axe de recherche qui consiste à modifier génétiquement la microalgue Phaeodactylum tricornutum. Il s’agit notamment de la modifier en surexprimant, sous-exprimant ou inactivant les gènes codant des facteurs de transcription (FTs) potentiellement impliqués dans la production de lipides. Le but de ce stage a été de : 1) sélectionner les FTs présentant une expression différentielle marquée en condition de stress azoté ; 2) construire les plasmides recombinés pour ces candidats en utilisant différentes méthodes de recombinaison génétique (surexpression, sous-expression et inactivation (KO)) ; 3) réaliser des transformations par électroporation et conjugaison bactérienne. L’analyse des données de séquençage ARN a fait ressortir 7 candidats appartenant à 5 familles (auréochromes, CCCH, HSF, MYB et TAZ). Deux constructions plasmidiques pour les méthodes de sur et sous-expression ont été réalisées avec succès et la microalgue transformée par électroporation. Les résultats ne sont à ce jour pas connus. Les plasmides pour la méthode de KO ont été construits par « Golden Gate » et ont été utilisés dans la technique de transformation par conjugaison. Les résultats indiquent la présence de colonies de Pt résistantes à la zéocine sur les boîtes de Pétri, confirmant la présence du plasmide PtPuc3-diaCas9 recombiné dans la microalgue. Des analyses biochimiques des mutants dans différentes conditions sont maintenant à effectuer.
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Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
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Dates et versions

dumas-02370974 , version 1 (19-11-2019)

Identifiants

  • HAL Id : dumas-02370974 , version 1

Citer

Romain Perdoux. Modification génétique des facteurs de transcription chez Phaeodactylum tricornutum. Sciences du Vivant [q-bio]. 2019. ⟨dumas-02370974⟩
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