Vers la modélisation physiopathologique de la granulomatose septique chronique pour de nouvelles approches thérapeutiques‎ : développement de la culture des cellules souches pluripotentes induites issues de fibroblastes de patients - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Access content directly
Master Thesis Year : 2013

Vers la modélisation physiopathologique de la granulomatose septique chronique pour de nouvelles approches thérapeutiques‎ : développement de la culture des cellules souches pluripotentes induites issues de fibroblastes de patients

Julie Brault
  • Function : Author
  • PersonId : 947344

Abstract

Chronic granulomatous disorder (CGD) is a rare immune inherited disorder in which patients suffer from recurrent life-threatening bacterial and fungal infections early in childhood. The most frequent form is the X-linked CGD (X-CGD) due to mutations in the CYBB gene encoding NOX2 one of the sub-units of the phagocytic NADPH oxidase complex, responsible for the production of microbicidal reactive oxygen species (ROS). To develop new therapeutic approaches, cellular models mimicking the pathology are needed. Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) are an invaluable tool for physiopathological modelization. The purpose of this project was to develop in our laboratory the culture and the methods of characterization of iPSCs in order to model CGD. For this, iPSCs reprogrammed from healthy and X-CGD patient's fibroblasts have successfully been cultured on feeder cells or on extracellular matrix. On one hand, their pluripotency ability was assessed with the expression of pluripotency markers by immunofluorescence and flow cytometry and on the other hand, with the generation of embryoid bodies composed of cells derived from the three embryonic germ layers. The karyotype analysis showed no chromosomal abnormalities. Finally, the patient's mutation responsible for the X-CGD was found in the XCGD-iPS cell line. Control and X-CGD iPS cells will be differentiated into hematopoietic progenitors and use to generate X-CGD humanized mouse model and to obtain mature phagocytic cells for the development of new therapies.
La Granulomatose septique chronique (CGD) est une maladie immunitaire et héréditaire rare diagnostiquée devant des infections sévères et récidivantes. La forme majoritaire de transmission liée à l'X (CGDX) est causée par des mutations dans le gène CYBB codant la sous-unité NOX2 du complexe NADPH oxydase, enzyme clé de la production de réactifs toxiques de l'oxygène (ROS) bactéricides par les cellules phagocytaires. Afin de développer de nouvelles approches thérapeutiques, il est nécessaire de posséder des modèles cellulaires mimant la maladie. Les cellules souches pluripotentes induites (iPS) représentent un outil inestimable pour la modélisation physiopathologique. L'objectif de ce projet était de mettre en place au laboratoire la culture et la caractérisation des cellules iPS pour modéliser la CGD. Pour cela, des cellules iPS reprogrammées à partir de fibroblastes d'un sujet sain et d'un patient atteint de CGDX ont été cultivées avec succès à la fois sur cellules nourricières et sur matrice extracellulaire. Leur capacité de pluripotence a été validée d'une part par l'expression de marqueurs de pluripotence par immunofluorescence et cytométrie en flux, et d'autre part grâce à la formation de corps embryoïdes constitués de cellules dérivées des trois lignées embryonnaires. L'analyse du caryotype n'a pas montré d'anomalie chromosomique. Enfin, la mutation du patient à l'origine de la CGD a été retrouvée dans les cellules iPS-CGDX. Les cellules iPS témoin et CGDX pourront donc être différenciées en progéniteurs hématopoïétiques pour la génération de souris humanisées, modèles de CGDX et pour l'obtention de cellules phagocytaires pour le développement de nouvelles thérapies.
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Dates and versions

dumas-00875988 , version 1 (23-10-2013)

Identifiers

Cite

Julie Brault. Vers la modélisation physiopathologique de la granulomatose septique chronique pour de nouvelles approches thérapeutiques‎ : développement de la culture des cellules souches pluripotentes induites issues de fibroblastes de patients. Sciences pharmaceutiques. 2013. ⟨dumas-00875988⟩
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