Détection qualitative et quantitative du virus de la fièvre de la vallée du Rift par PCR en temps réel : application à l'évaluation de l'efficacité de substances antivirales

Résumé : Le virus de la fièvre de la Vallée du Rift (RVFV), du genre phlébovirus (famille des Bunyaviridae) est un virus enveloppé à ARN négatif tri segmenté. Jusqu'en 2000, la circulation du RVFV était limitée au continent Africain, mais la récente épidémie mortelle qui a touché la Péninsule d'Arabie illustre de manière dramatique la nécessité de disposer de méthodes de diagnostic rapides, de traitements efficaces et de moyens prophylactiques. Une méthode pour quantifier le brin d'ARN S viral par RT-PCR en temps réel utilisant la technologie TaqMan® et ciblant le gène codant pour la protéine NSs a été développée. Les amorces et la sonde correspondantes ont été dessinées. Après optimisation de la réaction d'amplification et mise au point d'une courbe d'étalonnage à partir d'un ARN synthétique transcrit in vitro d'un plasmide, la RT-PCR en temps réel a été testée sur des échantillons d'ARN viral extrait de cellules Vero. La méthode s'est révélée spécifique de RVFV et a été utilisée avec succès pour détecter le génome viral dans des sérums d'animaux infectés par RVFV, mais aussi pour évaluer l'efficacité de plusieurs substances antivirales (ribavirine, IFNα, 6-azauridine et glycyrrhizine). Il a également été possible de détecter le génome viral dans des sérums humains artificiellement contaminés. Les résultats obtenus ont montré une forte corrélation entre les titres infectieux du virus et les quantités de génome viral mesurées par RT-PCR en temps réel. Cette nouvelle méthode pourrait être intéressante pour le diagnostic rapide et pour le criblage de nouvelles molécules antivirales car elle est sensible, permet un gain de temps et ne nécessite pas l'amplification et la manipulation de matériels infectieux. Elle pourrait être utilisée pour le suivi thérapeutique et la mesure de la charge virale.
Type de document :
Mémoires
Sciences pharmaceutiques. 2001
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Contributeur : Jean-Hugues Morneau <>
Soumis le : mercredi 7 décembre 2016 - 11:05:19
Dernière modification le : mercredi 23 août 2017 - 16:31:07
Document(s) archivé(s) le : mardi 21 mars 2017 - 07:11:26

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  • HAL Id : dumas-01411211, version 1

Citation

Stephan Garcia. Détection qualitative et quantitative du virus de la fièvre de la vallée du Rift par PCR en temps réel : application à l'évaluation de l'efficacité de substances antivirales. Sciences pharmaceutiques. 2001. 〈dumas-01411211〉

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