Développement d'une méthode de dosage à base d'aptamères impliquant la formation d'un complexe boucle - boucle

Résumé : Les immunodosages sont omniprésents dans les laboratoires de biologie médicale. Un état des lieux des méthodes d’immunoanalyse utilisées au sein du Département de Biochimie, Toxicologie et Pharmacologie (DBTP) du CHU de Grenoble a été établi. Le dosage des molécules de petite taille n’utilise qu’un seul anticorps comme outil de reconnaissance moléculaire, ce qui pourra générer des défauts de sensibilité et de spécificité. La recherche de nouvelles méthodes de dosage dédiées aux petites molécules, spécifiques, robustes, peu coûteuses sont donc nécessaires pour s’affranchir des limites de l’immunoanalyse. Les aptamères sont des oligonucléotides sélectionnés par méthode SELEX pour se lier spécifiquement et avec une forte affinité à une cible. De par leur simplicité de synthèse et leur possibilité de reconnaître des cibles extrêmement variées, ils offrent une alternative très intéressante aux anticorps. Nous rapportons ici une nouvelle technique en phase hétérogène, basée sur l’induction par la cible d’un complexe kissing entre deux oligonucléotides (ELAKCA). Nous avons travaillé avec un aptamère modifié (aptaswitch) changeant de conformation au contact de sa cible. Une fois immobilisé dans les puits via une liaison amide, l’aptaswitch forme une épingle à cheveux en présence de la cible. Sa boucle apicale va être reconnue par la boucle d’un second oligonucléotide (aptakiss) organisé également en épingle à cheveux, pour former un complexe kissing. Le système a été appliqué au dosage de l’adénosine, la spécificité ainsi que les conditions de stockage et de réutilisation ont été étudiées. Enfin une courbe de calibration de l’adénosine a été réalisée en milieu complexe.
Type de document :
Mémoires
Sciences pharmaceutiques. 2015
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Contributeur : Jean-Hugues Morneau <>
Soumis le : vendredi 13 janvier 2017 - 18:22:31
Dernière modification le : mercredi 23 août 2017 - 16:30:06
Document(s) archivé(s) le : vendredi 14 avril 2017 - 19:09:45

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Citation

Benoit Chovelon. Développement d'une méthode de dosage à base d'aptamères impliquant la formation d'un complexe boucle - boucle. Sciences pharmaceutiques. 2015. 〈dumas-01435343〉

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