Mise en place d’un système cellulaire non infectieux pour l’étude de la réplication du virus chikungunya - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2017

Establishment of a non-infectious cellular model for studying CHIKV’s replication

Mise en place d’un système cellulaire non infectieux pour l’étude de la réplication du virus chikungunya

Résumé

Chikungunya virus (CHIKV; genus Alphavirus, family Togaviridae), considered as a reemerging pathogen, has recently caused several major outbreaks of unprecedented scale affecting millions of people and making its associated disease a current public health concern. Currently, no vaccines or antiviral drugs are available, emphasizing the need to gain more insight into its life cycle and to develop effective antiviral strategies. As CHIKV is a 3 biosafe laboratory agent, the aim of this study was to develop a non-infectious model for studying CHIKV’s replication in a cellular system. To this end, a CHIKV’s replicon, a non-infectious RNA with autonomous replication, was constructed. It consists of genes encoding the viral replication complex associated with GLuc, a marker gene allowing its detection. A stable cell line harboring a noncytotoxic CHIKV’s replicon was developed through the introduction of mutations within genes encoding nonstructural proteins. Only Bhk-21 cells proved to be competent for this replication, due to the cytopathic effect of the nonstructural proteins expression in the other cell lines studied. The cell line developed in this study represents a biosafe and efficient research tool valuable for studying viral replication as well as for screening CHIKV replication inhibitors.
Le virus chikungunya (CHIKV ; genre Alphavirus, famille Togaviridae), pathogène ré-émergent, a récemment causé des épidémies d’une ampleur sans précédent, affectant des millions de personnes, et faisant de la maladie du même nom un problème actuel de santé publique. A ce jour, ni traitement antiviral, ni vaccin ne sont disponibles, d’où la nécessité d’entreprendre des travaux de recherche pour mieux appréhender le cycle viral et ainsi développer des stratégies antivirales efficaces. Le CHIKV étant un pathogène de classe 3, l’objectif de ce travail consistait à mettre en place un système cellulaire non infectieux pour l’étude de la réplication de ce virus. Pour cela un réplicon, ARN non infectieux à réplication autonome, a été construit. Il se compose des gènes codant le complexe de réplication viral associés à la GLuc, un gène permettant sa détection. Grâce à l’introduction de mutations dans les gènes codant les protéines non-structurales, une lignée cellulaire exprimant stablement un réplicon non cytotoxique du CHIKV a été développée. Seules les cellules Bhk-21 se sont révélées compétentes pour cette réplication, l’effet cytopathogène associé à l’expression des protéines non-structurales, étant trop important sur les autres lignées cellulaires étudiées. Les approches mises en place dans ce travail ont donc permis la création d’un outil de recherche biologiquement sûr et efficace permettant aussi bien l’exploration de la réplication virale que le criblage d’inhibiteurs potentiels de cette étape du cycle viral.
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Dates et versions

dumas-01528785 , version 1 (29-05-2017)

Identifiants

  • HAL Id : dumas-01528785 , version 1

Citer

Alice Blosse. Mise en place d’un système cellulaire non infectieux pour l’étude de la réplication du virus chikungunya. Sciences pharmaceutiques. 2017. ⟨dumas-01528785⟩
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