Amylose de la bêta-2 microglobuline : caractérisation de l'épitope reconnu par un anticorps monoclonal : étude préliminaire de la bêta-2 microglobuline et de l'épitope par dichroïsme circulaire
Résumé
L'amylose, due à l'agrégation de la β2-m au niveau de certains tissus, reste une des complications majeures du traitement de l'insuffisance rénale chronique par la dialyse. Le développement de cette pathologie, qui touche la grande majorité des malades traités par dialyse, est insidieux et se prolonge sur de nombreuses années. Une meilleure connaissance de cette maladie passe par la compréhension des phénomènes qui déclenchent l'agrégation de la β2-m et son dépôt dans les tissus. La β2-m, protéine majeure du CMH, présente la propriété, de s'organiser en structure fibrillaires non cristallines. Ces fribrilles se déposent préférentiellement dans certains tissus aboutissant, après quelques années, à une pathologie invalidante et douloureuse. J'ai eu, lors de mon stage Erasmus, la chance d'être intégré dans une équipe réputée, qui travaille sur l’amylose. Lors de ce séjour en Italie, l'utilisation de l'anticorps monoclonal 14H3, synthétisé par l'équipe du Pr FERRI, nous a permis de montrer qu'un épitope de la β2-m semblait jouer un rôle primordial dans le phénomène d'agrégation. En effet, lorsqu’une biopsie est mise à incuber avec cet anticorps, la structure fibrillaire et organisée des dépôts devient amorphe. Ceci est le signe que l'anticorps a désorganisé le réseau de fibrilles. La caractérisation de l'épitope reconnu par l'anticorps 14H3, fut entreprise en utilisant des techniques classiques de biologie moléculaire (séquençage de la protéine, synthèse de peptides, dosage immuno-enzymatique, etc...). Ainsi, nous avons montré que cet épitope était constitué de 7 acides aminés. L'étude du spectre de dichroïsme circulaire de la β2-m et du peptide nous a apporté des renseignements sur leur structure secondaire. En outre, cette technique, simple à mettre en œuvre, permet d'étudier l'influence de divers facteurs sur la structure des protéines (concentration, pH, oxydation, attaque enzymatique ou chimique). Nous avons ainsi montré qu'une modification de la structure du peptide était dépendante de sa concentration. Le travail exposé dans cette thèse ne représente qu'une étape préliminaire dans la compréhension du phénomène d'agrégation de la β2-m. De nombreuses questions restent sans réponses et devront faire l'objet de travaux futurs. L'étude en microscopie électronique des dépôts amyloïde de β2-m, met en évidence des structures fibrillaires. Mais, par manque de temps, nous n'avons pas pu étudier, par dichroïsme circulaire, la structure de la β2-m les dépôts. Montre-t-elle une modification par rapport à la protéine native ? Le phénomène d'agrégation de la β2-m, reproductible in vitro [CONNORS 1985], pourrait être étudié par dichroïsme circulaire, afin d'éclaircir le rôle de la structure secondaire dans le phénomène d'agrégation in vivo. Les coûts, élevés, de la synthèse des peptides pouvant être intégrés dans l'épitope reconnu par l'anticorps 14H3, a limité nos études à la partie C-terminale de l'épitope. D'autres peptides devront être synthétisés pour étudier le rôle des acides aminés situés dans la partie N-terminale. Afin d'approfondir la connaissance de la physiopathologie de l’amylose, on peut envisager différentes approches : * Recherche d'autres fragments de la β2-m, susceptibles de participer aux mécanismes d'agrégation ; * Evaluation du rôle des mécanismes d'oxydation et de glycation dans l'altération de la protéine et dans la formation des fibrilles ; * Application de ces travaux préliminaires à d'autres pathologies voisines (maladie d'Alzheimer, Angiopathie du diabète,…) ; * Utilisation d'autres techniques pour approfondir les modifications ou les clivages de la structure (spectrofluorimétrie, RMN en phase solide, isoélectrofocalisation, HPLC). Une meilleure connaissance des phénomènes de fibrillation est nécessaire pour envisager la mise au point d'un test de laboratoire pour dépister la maladie avant l'apparition des signes cliniques. La recherche d'un traitement peut s'orienter dans deux axes : * La fabrication de membranes de dialyse très perméables ou à haut pouvoir d'adsorption de la β2-m ; * La mise au point d'une molécule capable de dissocier les fibrilles déjà formées et déposées dans les tissus. Ce travail, effectué au sein de l'équipe de l'Institut de Biochimie de l'Université de Pavie (Italie) m'a permis d'acquérir la maîtrise de techniques essentielles à l'étude des protéines et de comprendre la démarche intellectuelle nécessaire aux travaux de recherche.
Domaines
| Origine | Fichiers produits par l'(les) auteur(s) |
|---|---|
| Licence |
