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Master Thesis

Optimisation d’un test d’activité du facteur tissulaire sur les microvésicules

Résumé : Le complexe formé entre le facteur tissulaire (FT) et le facteur VII est le principal activateur de la coagulation. Des niveaux élevés d'activité pro-coagulante dépendante du FT portée par les micro-vésicules (MV) sont détectables chez les patients présentant un risque accru de thrombose. Cependant, l’association entre l’activité du FT sur les MV (activité MV-FT) et la thrombose est limitée par de multiples mécanismes de thrombose liée aux cancers, un rôle plus complexe des MV dans la thrombose et enfin des limites technologiques dans le test mesurant l’activité MV FT. Plusieurs méthodes ont été décrites pour mesurer l'activité MV-FT, mais elles sont gênées par une sensibilité et une spécificité limitées. L'objectif est d'augmenter la sensibilité de l'analyse de l'activité de MV-FT en comparaison à un test préexistant (appelé test de Chapel Hill). L’amélioration du dosage de l'activité du FT a été réalisée en optimisant i/la vitesse et le temps de centrifugation, ii/l’utilisation d'un puissant anticorps anti-FT inhibiteur iii/l’utilisation de FVII et d'un substrat fluorogène pour augmenter la spécificité. La spécificité de mesure de l’activité MV-FT a été démontrée par l’absence d’activité sur une lignée de cellules qui expriment le FT en utilisant un anticorps monoclonal anti-FT appelé SBTF-1, qui présente un effet inhibiteur de FT supérieur à celui de l’anticorps monoclonal anti-FT humain, le plus utilisé dans la littérature, appelé HTF-1. Des expériences utilisant du sang provenant d'individus en bonne santé, stimulés ou non par le LPS, ou de plasma enrichi avec 3 niveaux différents de MV ont montré que le nouveau dosage était plus sensible et détecte de l'activité du FT dans les échantillons de plasma sans plaquettes (PFP) provenant d'individus sains. Cependant, le test a été limité par une variabilité inter test, principalement due à l'étape de centrifugation. Ainsi, nous avons amélioré la sensibilité de l'activité MV-FT sans perdre de spécificité. Ce nouveau test pourrait être utilisé pour évaluer les niveaux de MV-FT en tant que biomarqueur potentiel du risque thrombotique chez les patients.
Document type :
Master Thesis
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https://dumas.ccsd.cnrs.fr/dumas-02332739
Contributor : Pharmacie Amu <>
Submitted on : Friday, October 25, 2019 - 8:49:25 AM
Last modification on : Friday, October 23, 2020 - 4:54:13 PM

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VALLIER Loris. Mémoire de DES...
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  • HAL Id : dumas-02332739, version 1

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Loris Vallier. Optimisation d’un test d’activité du facteur tissulaire sur les microvésicules. Sciences pharmaceutiques. 2019. ⟨dumas-02332739⟩

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