Étude de l'impact de trois conditions d'élevage du poisson zèbre et mise au point d'une méthode de congélation de sa semence dans l'optique de réaliser une analyse comparative entre le niveau de méthylation de l'ADN des spermatozoïdes de poisson zèbre et d'étalon après congélation/décongélation - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Access content directly
Master Thesis Year : 2013

Étude de l'impact de trois conditions d'élevage du poisson zèbre et mise au point d'une méthode de congélation de sa semence dans l'optique de réaliser une analyse comparative entre le niveau de méthylation de l'ADN des spermatozoïdes de poisson zèbre et d'étalon après congélation/décongélation

Pierre Milon
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Abstract

DNA methylation is an epigenetic mark which participates in the regulation of gene expression. It is suggested that the methylation profile of spermatozoa is an important factor for early embryonic development. The purpose of this study was an evaluation of the impact of cryopreservation on sperm DNA methylation. We have selected two species with very different sperm nuclear organization, the zebrafish (Danio rerio) and the stallion. Zebrafish produce a very low quantity of gametes. In a first step, we sought to improve gamete production by way of the fish diet. We have shown that the Tétramin® + Gemma Wean® diet improved growth and favored gametes release. Gametes quality was equivalent to that obtained with a diet supplemented with live brine shrimps. In a second step, we tried to optimize the method of zebrafish sperm cryopreservation. The optimal cryopreservation method in our conditions was to use a cryoprotectant containing 8% of methanol and 63mM of sucrose at a cooling rate of -10°C/min. After cryopreservation, the level of DNA methylation of fish spermatozoa was altered completely randomly. Some sperm showed hypermethylation, other hypomethylation. No methylation data were obtained on stallion sperm, due to methodological difficulties whose origin was sought.
La méthylation de l'ADN est une marque épigénétique qui participe à la régulation de l'expression des gènes, et il est avancé que le profil de méthylation des spermatozoïdes est important pour le développement embryonnaire précoce. La finalité du présent travail est d'évaluer l'impact de la cryoconservation du sperme sur la méthylation de l'ADN. Deux espèces dont l'organisation nucléaire des spermatozoïdes est très différente ont été choisies, le poisson zèbre (Danio rerio) et le cheval. En préalable, nous devions optimiser la méthode de cryoconservation du sperme de poisson zèbre. Face à la très faible production de gamètes chez cette espèce, nous avons recherché une amélioration de la production gamétique en jouant sur l'alimentation des géniteurs. Nous avons montré que le régime Tétramin® + Gemma Wean® améliorait la croissance et favorisait l'émission des gamètes. La qualité des gamètes avec ce régime est équivalente à celle obtenue avec un régime supplémenté en proies vivantes. La méthode de cryoconservation optimale dans nos conditions a consisté à utiliser un cryoprotecteur contenant 8 % de méthanol et 63 mM de saccharose, à une vitesse de -10 °C/min. Après cryoconservation, le niveau de méthylation de l'ADN des spermatozoïdes de poisson est affecté de façon complètement aléatoire, certains spermes montrant une hyperméthylation, d'autres une hypométhylation. Aucune donnée de méthylation n'a pu être obtenue sur le sperme d'étalon, du fait de difficultés méthodologiques dont nous avons cherché à comprendre l'origine.
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dumas-00941937 , version 1 (04-02-2014)

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  • HAL Id : dumas-00941937 , version 1

Cite

Pierre Milon. Étude de l'impact de trois conditions d'élevage du poisson zèbre et mise au point d'une méthode de congélation de sa semence dans l'optique de réaliser une analyse comparative entre le niveau de méthylation de l'ADN des spermatozoïdes de poisson zèbre et d'étalon après congélation/décongélation. Sciences agricoles. 2013. ⟨dumas-00941937⟩
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