Mise au point du dosage génique du gène OCRL1 par Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA)‎ : application au syndrome de Lowe et à la maladie de Dent - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2009

Mise au point du dosage génique du gène OCRL1 par Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA)‎ : application au syndrome de Lowe et à la maladie de Dent

Charles Coutton
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 872909

Résumé

The oculocerebrorenal syndrome of Lowe (OCRL) is a rare X-linked recessively inherited disease characterized by a severe pleiotropic phenotype including mental retardation, bilateral congenital cataract and renal Fanconi syndrome. Dent disease (DD) is an X-linked renal proximal tubulopathy. Mutations in the OCRL1 gene (oculocerebrorenal syndrome of Lowe, type 1) have been associated with both diseases but most of all with OCRL. While more than 150 mutations have been described to date only 5 % are exonic deletions. Moreover no duplication (homogen or mosaic) and no deletion mosaicism have yet been described in the both diseases. We have designed four synthetic mutiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) probe sets that measures exons copy number in OCRL1 gene with high precision allowing rapid gene quantification. After OCRL1 MLPA probe sets validation, we screened four female patients with an affected relative harbouring a known genomic deletion and 11 male and 4 female patients presenting with an incomplete phenotype or even typical for two of them and previously diagnosed as sequence-negative. Two of four female were detected as carrier for the mutation previously identified in the affected relative. Neither deletion nor duplication (mosaic or homogen) were found in the 15 patients with a milder or complete phenotype, and previously diagnosed as sequence-negative, thus ruling out the involvement of OCRL1 gene. These results of our study provide no further evidence for the hypothesis that duplications and somatic mosaic deletions account the fraction of patients who have no detectible mutation after the usual screening procedures.
Le syndrome de Lowe et la maladie de Dent sont deux maladies génétiques très rares de transmission récessive liée au chromosome X chez lesquelles des délétions du gène OCRL1 ont été décrites. Bien que simple à détecter chez un homme, ces réarrangements sont délicats à mettre en évidence chez les femmes potentiellement conductrices de la maladie avec les techniques de diagnostic de première intention (ex : séquençage) en raison de la présence des deux chromosomes X et donc de 2 copies du gène OCRL1. Leur détection, de même que la détection d'autres réarrangements génomiques potentiellement causals de la maladie tels que les duplications ou les délétions en mosaïque, imposent l'utilisation de techniques quantitatives complémentaires souvent longues, fastidieuses et peu résolutives. La technique de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) se distingue des autres techniques quantitatives par sa rapidité et son excellente résolution. Ainsi, 24 sondes MLPA spécifiques ont été modélisées et validées pour quantifier rapidement et simplement le gène OCRL1. Cette technique a permis de préciser le statut de conductrice de 5 femmes avec un apparenté atteint porteur d'une délétion génomique d'OCRL1. Enfin, malgré sa sensibilité, aucune délétion ou duplication n'a été retrouvée chez 15 patients présentant un tableau incomplet voire typique du syndrome de Lowe pour deux d'entre eux, et chez lesquels l'analyse préalable par séquençage d'OCRL1 s'était révélée non contributive. Notre technique MLPA spécifique du gène OCRL1 est fiable et robuste et ainsi applicable en routine comme méthode diagnostique complémentaire du séquençage pour le syndrome de Lowe et la maladie de Dent. C'est un outil simple et performant pour déterminer le statut des femmes potentiellement conductrices de délétions. De plus, les résultats de notre étude démontrent que les duplications du gène OCRL1 sont des événements probablement exceptionnels. Ils fragilisent un peu plus l'hypothèse que les réarrangements génomiques en mosaïque ou les duplications contribueraient à expliquer la fraction de patients avec un phénotype plus ou moins complet et pour lesquels aucune mutation n'avait pu être identifiée avec les techniques conventionnelles.
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Citer

Charles Coutton. Mise au point du dosage génique du gène OCRL1 par Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA)‎ : application au syndrome de Lowe et à la maladie de Dent. Sciences pharmaceutiques. 2009. ⟨dumas-01059523⟩
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