Mise au point de la PCR-aspergillus en vue du diagnostic biologique de l'aspergillose invasive

Résumé : Aspergillus fumigatus est un champignon filamenteux, responsable d'une infection gravissime chez les immunodéprimés (neutropénie, corticothérapie, transplantation... ) : l'aspergillose invasive (AI). Le pronostic dépend de deux facteurs : la restauration des défenses immunitaires et la prescription d'une thérapeutique antifongique précoce et à forte dose. Le médecin doit pouvoir s'appuyer sur un diagnostic rapide et formel. Le diagnostic de certitude est rarement porté car il nécessite des prélèvements invasifs souvent contre-indiqués chez ces patients. En pratique, l'AI est possible ou probable, d'après un ensemble d'arguments cliniques, radiologiques et biologiques. Cette infection au diagnostic difficile constitue, en théorie, une bonne application de la PCR (Polymerase Chain Reaction). Après analyse critique de la littérature, nous avons choisi d'adapter et d'optimiser sur une souche référencée d'A. fumigatus (CBS 144-89), une technique de PCR décrite par Melchers et al (J. Clin. Microbiol. 1994) pour la détection de l'ADN du genre Aspergillus. La sensibilité élevée de la méthode permet de détecter 7,5 pg d' ADN sur le gel d'agarose et 1 pg par Southern Blot. L'utilisation d'une méthode de détection PCR-ELISA commercialisée (Boerhinger Mannheim) permet une détection à la fois sensible et rapide des produits amplifiés, nécessaire à l'adaptation en routine au laboratoire. L'ADN de souches isolées de prélèvements de patients atteints d'AI a été amplifié. Les PCR réalisées sur l'ADN de souches référencées d'autres espèces d'Aspergillus (A.terreus, A.nidulans, A.fiavus, A.niger) et sur des souches d'autres champignons filamenteux (Penicillium sp, Paecilomyces variotii, Fusarium sp) ont confirmé la spécificité décrite. L'étude de spécificité sera étendue à d'autres microorganismes. Une étude bioclinique réalisée sur des échantillons biologiques de patients atteints d'Al, sera par la suite indispensable pour évaluer la place de la PCR dans la stratégie diagnostique de l'aspergillose invasive.
Type de document :
Mémoires
Sciences pharmaceutiques. 1999
Liste complète des métadonnées

Littérature citée [62 références]  Voir  Masquer  Télécharger

https://dumas.ccsd.cnrs.fr/dumas-01534107
Contributeur : Jean-Hugues Morneau <>
Soumis le : mercredi 7 juin 2017 - 11:23:19
Dernière modification le : mercredi 23 août 2017 - 16:40:21
Document(s) archivé(s) le : vendredi 8 septembre 2017 - 12:32:24

Identifiants

  • HAL Id : dumas-01534107, version 1

Citation

Dominique Beaudet. Mise au point de la PCR-aspergillus en vue du diagnostic biologique de l'aspergillose invasive. Sciences pharmaceutiques. 1999. 〈dumas-01534107〉

Partager

Métriques

Consultations de la notice

58

Téléchargements de fichiers

287