Human sperm labeling by annexin V, what meanning?
Marquage du spermatozoïde humain par l’Annexine V, quelle signification ?
Résumé
Introduction: translocation of phosphatidylserine (PS) from the inner to the outer leaflet of the plasma membrane occurs in spermatozoa during changes in the organization of membrane phospholipids. Externalisation of phosphatidylserine is known to be one of the earliest signs of apoptosis and is evidenced by annexin V labeling. Methods: a flow cytometric analysis of the annexin V binding in parallel with CD46, caspase 3 and propidium iodide was performed. 29 sperm samples were analyzed at different incubation times and with or without A23187 ionophore calcium. Results: the results showed a significant increase in phosphatidylserine externalisation with calcium ionophore A23187, while at the same time caspase 3 increased to a lesser extent. The calcium ionophore A23187 led to a significant increase of the number of living spermatozoa exhibiting phosphatidylserine. At the same time, calcium ionophore A23187 induced an increase in the markers of the acrosomal reaction (CD46, chlortetracycline). Conclusion: these results suggest that the externalisation of phosphatidylserine in the spermatozoa is not related to an apoptosis mechanism but rather to the capacitation / acrosomic reaction sequence.
Introduction : la translocation de la phosphatidylsérine du feuillet membranaire interne vers le feuillet membranaire externe a lieu chez le spermatozoïde au cours de modifications de l’organisation des phospholipides membranaires. L’externalisation de la phosphatidylsérine est connue pour être un signe précoce d’apoptose. La phosphatidylsérine peut être mise en évidence grâce à l’annexine V. Matériel et méthodes : une analyse par cytométrie de flux du marquage par l’annexine V en parallèle du CD46, des caspases 3 activées et de l’iodure de propidium a été réalisée. Les éjaculats de 29 patients ont été analysés à différents temps d’incubation et avec ou sans calcium ionophore A23187. Résultats : nous avons mis en évidence une augmentation significative de l’externalisation de la phosphatidylsérine en présence de calcium ionophore A23187. Dans un même temps le marquage par caspase 3 augmentait mais dans une proportion moindre. On objectivait donc une augmentation du nombre de spermatozoïdes vivants exposant la phosphatidylsérine. Le calcium ionophore A23187 induisait aussi une augmentation des marqueurs de la réaction acrosomique (CD46, Chlortetracycline). Conclusion : ces résultats suggèrent donc que l’externalisation de la phosphatidylsérine chez le spermatozoïde n’est pas à rapporter à un mécanisme d’apoptose mais plutôt à la séquence capacitation/réaction acrosomique.
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