Développement et caractérisation de VHH anti-transferrine - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2017

Développement et caractérisation de VHH anti-transferrine

Résumé

La transferrine (Tf) est une protéine soluble, responsable de l’approvisionnement des cellules en fer par endocytose du complexe Tf - récepteur de la Tf (RTf). Dans certains cancers, le RTf est surexprimé. Le RTf est présent au pôle luminal des cellules endothéliales de la barrière hémato-encéphalique (BHE), ainsi qu’à la membrane des neurones, laissant supposer qu’une partie du fer est transportée par la Tf à travers la BHE. Des VHH, fragments d’anticorps (Ac) de camélidé ont été produits afin de cibler la Tf. Ces VHH possèdent de nombreux avantages vis à vis des Ac conventionnels. Les VHH sont rapidement éliminés par l’organisme. Suite à l’immunisation d’un lama avec de la Tf humaine (hTf), une banque de VHH a été construite, les VHH anti-Tf ont été sélectionnés par phage display puis produits en fusion avec la Green Fluorescent Protein (GFP). Ces VHH anti-Tf GFP ont été caractérisés par thermophorèse (MST), cytométrie en flux et microscopie confocale. Au cours de ce projet, 3 VHH anti-Tf ont été développés. C3 et E9 ont une affinité nanomolaire pour la hTf. Ils interagissent avec la Tf et n’empêchent pas l’interaction Tf-RTf, de plus le VHH C3 est internalisé à l’intérieur des cellules. Le VHH D10 interagit avec la hTf et celle de souris et empêche l’interaction Tf-RTf, par conséquent, il n’est pas internalisé dans les cellules. Ce projet s’est poursuit par une étude in vivo afin d’étudier la biodistribution du VHH C3-GFP et la demi-vie du VHH D10-GFP. Les résultats des études in vivo n’ont pas été ceux attendus, néanmoins ils sont à interpréter avec précaution du fait de la fusion à la GFP, fluorophore non pertinent pour un suivi de fluorescence in vivo.
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DEYME Laure. Thèse d'exercice 2017.pdf (5.7 Mo) Télécharger le fichier
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dumas-01677755 , version 1 (08-01-2018)

Identifiants

  • HAL Id : dumas-01677755 , version 1

Citer

Laure Deyme. Développement et caractérisation de VHH anti-transferrine. Sciences pharmaceutiques. 2017. ⟨dumas-01677755⟩
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