Développement et caractérisation de VHH anti-transferrine
Résumé
La transferrine (Tf) est une protéine soluble, responsable de l’approvisionnement des cellules en fer par endocytose du complexe Tf - récepteur de la Tf (RTf). Dans certains cancers, le RTf est surexprimé. Le RTf est présent au pôle luminal des cellules endothéliales de la barrière hémato-encéphalique (BHE), ainsi qu’à la membrane des neurones, laissant supposer qu’une partie du fer est transportée par la Tf à travers la BHE. Des VHH, fragments d’anticorps (Ac) de camélidé ont été produits afin de cibler la Tf. Ces VHH possèdent de nombreux avantages vis à vis des Ac conventionnels. Les VHH sont rapidement éliminés par l’organisme.
Suite à l’immunisation d’un lama avec de la Tf humaine (hTf), une banque de VHH a été construite, les VHH anti-Tf ont été sélectionnés par phage display puis produits en fusion avec la Green Fluorescent Protein (GFP). Ces VHH anti-Tf GFP ont été caractérisés par thermophorèse (MST), cytométrie en flux et microscopie confocale.
Au cours de ce projet, 3 VHH anti-Tf ont été développés. C3 et E9 ont une affinité nanomolaire pour la hTf. Ils interagissent avec la Tf et n’empêchent pas l’interaction Tf-RTf, de plus le VHH C3 est internalisé à l’intérieur des cellules. Le VHH D10 interagit avec la hTf et celle de souris et empêche l’interaction Tf-RTf, par conséquent, il n’est pas internalisé dans les cellules.
Ce projet s’est poursuit par une étude in vivo afin d’étudier la biodistribution du VHH C3-GFP et la demi-vie du VHH D10-GFP. Les résultats des études in vivo n’ont pas été ceux attendus, néanmoins ils sont à interpréter avec précaution du fait de la fusion à la GFP, fluorophore non pertinent pour un suivi de fluorescence in vivo.
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
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