Recrutement de CD2AP par les complexes de réplication du virus de l’hépatite C - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2019

CD2AP recruitment in Hepatitis C Virus replication complexes

Recrutement de CD2AP par les complexes de réplication du virus de l’hépatite C

Résumé

Hepatitis C virus (HCV) is a small, enveloped, single-stranded positive-sense RNA virus. It infects human hepatocytes and its genome is replicated within cytoplasmic replication complexes. According to preliminary results, CD2AP, a soluble protein composed of three SH3 domains, a proline-rich domain, an actin-binding motif and a coiled-coil domain, is recruited by these complexes. In order to determine the mechanism of CD2AP recruitment, truncated CD2AP mutants were generated and expressed into Huh-7 cells replicating HCV RNA. Confocal microscopy studies revealed that SH3-1 and SH3-2 domains were responsible of CD2AP recruitment. PXPXPR motifs have been reported to specifically interact with CD2AP SH3 domains. One such motif was found in HCV genome, just upsteam of the third domain of NS5A viral protein. A mutated replicon (minimal replication unit of the viral genome) was generated to test the importance of this motif. The endogenous CD2AP protein was not recruited anymore by replication complexes of the mutated replicon, suggesting that CD2AP recruitment is caused by direct interaction with NS5A. Co-immunoprecipitation experiments would be necessary to confirm our hypothesis.
Le virus de l’hépatite C est un petit virus enveloppé à ARN monocaténaire de polarité positive. Il infecte les hépatocytes humains et se réplique au sein de complexes de réplication cytoplasmiques. D’après des résultats préliminaires, CD2AP, une protéine soluble composée de trois domaines SH3, un domaine riche en prolines, un motif d’interaction avec l’actine et un domaine coiled-coil, est recrutée au sein de ces complexes. Afin d'étudier le mécanisme de recrutement, des troncations de CD2AP ont été réalisées puis transfectées dans des cellules répliquant le génome viral. L’étude des cellules transfectées au microscope confocal a révélé que les domaines SH3-1 et SH3-2 sont responsables du recrutement de CD2AP. D’après la littérature, le motif PXPXPR est spécifique de l’interaction avec les domaines SH3 de CD2AP, or ce motif est retrouvé une fois dans la séquence des protéines virales, en amont du domaine III de NS5A. Un réplicon (unité minimale de réplication du génome viral) muté pour ce motif a été généré. La protéine CD2AP endogène n’est plus recrutée lorsque ce motif est muté, ce qui suggère que son recrutement s’effectue par interaction directe avec NS5A. Des expériences de co-immunoprécipitation seraient nécessaires pour confirmer notre hypothèse.
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Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)

Dates et versions

dumas-02370341 , version 1 (19-11-2019)

Identifiants

  • HAL Id : dumas-02370341 , version 1

Citer

Esther Martin de Fourchambault. Recrutement de CD2AP par les complexes de réplication du virus de l’hépatite C. Sciences du Vivant [q-bio]. 2019. ⟨dumas-02370341⟩
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