Mise au point et validation d’une méthode de dosage de la fraction libre plasmatique de 8 β-lactamines et application chez des patients de réanimation - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance
Master Thesis Year : 2018

Development and validation of a dosing method in plasma of the unbound fraction of 8 beta-lactam and application in patients from intensive care unit

Mise au point et validation d’une méthode de dosage de la fraction libre plasmatique de 8 β-lactamines et application chez des patients de réanimation

Abstract

Our work is part of a prospective study called "hyperclairance" with the aim of determining whether augmented renal clearance can lead to a risk of microbiological and clinical failure because of a decrease in free fraction of plasma concentrations for 8 β-lactams (cefepime, ceftazidime, meropenem, ceftriaxone, cefotaxime, cefazoline, piperacillin and tazobactam). In the absence of a method for the simultaneous determination of the free fraction of the antibiotics included in the study, the goal is to develop such a method and then to implement it on plasma samples from the patients in intensive care unit. The development of a method for dosing the free fraction of drugs is somewhat complex compared to the dosage of the total fraction. The protein-drug binding is influenced by certain parameters such as pH, temperature or the composition of the plasma matrix itself. Added to this are other issues such as protein concentration-de! pendent binding, nonspecific binding to devices and the lack of stability of some analytes that may further complicate the development and the dosage of the free fraction. Given the nature of the molecules to be dosed and the difference in composition between plasma blanks and matrix of the target population, the method was validated by loading the calibrators after the ultrafiltration in a filtrate derived from a plasma pool of healthy donors. Thus, the recovery of ultrafiltration was evaluated to determine a correction factor for each drug and intended to be applied to the results of the dosages of the patients. The dosing method, validated according to the recommendations of the European Medicines Agency, will include a first ultrafiltration step followed by a solid phase extraction step and finally a HPLC-UV step for the separation and the quantification.
Notre travail s’intègre dans une étude prospective intitulée « hyperclairance » ayant pour objectif de déterminer si l’hyperclairance rénale peut conduire à un risque d’échec microbiologique et clinique via une diminution des concentrations plasmatiques en fraction libre pour 8 β-lactamines (cefepime, ceftazidime, meropenem, ceftriaxone, cefotaxime, cefazoline, piperacilline et tazobactam). En l’absence de méthode de dosage simultanée de la fraction libre des antibiotiques inclus dans l’étude, l’objectif est de mettre au point une telle méthode puis de la mettre en application sur des échantillons plasmatiques provenant des patients de réanimation. La mise au point d’une méthode de dosage de la fraction libre des médicaments relève d’une certaine complexité en comparaison du dosage de la fraction totale. La liaison protéine-médicament est influencée par certains paramètres comme le pH, la! température ou encore la composition de la matrice plasmatique. A cela s’ajoute d’autres problématiques comme la fixation protéique concentration dépendante, la fixation non spécifiques aux supports et le manque de stabilité de certains analytes qui peuvent complexifier davantage la mise au point et le dosage de la fraction libre. Etant donné la nature des molécules à doser et de la différence de composition entre blancs de plasma et matrice de la population cible, la méthode a été validée en chargeant les calibrants après l’étape de récupération de la fraction libre dans un diffusat issu d’un pool de plasma de donneurs sains. Ainsi, le rendement de l’ultrafiltration a été évalué afin de déterminer un facteur de correction pour chaque molécule et destiné à être appliqué aux résultats des dosages des patients. La méthode de dosage, validée selon les recommandations de l’agence européenne du médicament comportera une première étape d’ultrafiltration suivi d’une étape d’extraction en phase solide liquide et enfin une étape de séparation et de quantification par HPLC-UV.
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dumas-03476914 , version 1 (13-12-2021)

Identifiers

  • HAL Id : dumas-03476914 , version 1

Cite

Nicolas d'Houdain. Mise au point et validation d’une méthode de dosage de la fraction libre plasmatique de 8 β-lactamines et application chez des patients de réanimation. Sciences du Vivant [q-bio]. 2018. ⟨dumas-03476914⟩
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