Notre travail s’intègre dans une étude prospective intitulée « hyperclairance » ayant pour objectif de déterminer si l’hyperclairance rénale peut conduire à un risque d’échec microbiologique et clinique via une diminution des concentrations plasmatiques en fraction libre pour 8 β-lactamines (cefepime, ceftazidime, meropenem, ceftriaxone, cefotaxime, cefazoline, piperacilline et tazobactam). En l’absence de méthode de dosage simultanée de la fraction libre des antibiotiques inclus dans l’étude, l’objectif est de mettre au point une telle méthode puis de la mettre en application sur des échantillons plasmatiques provenant des patients de réanimation. La mise au point d’une méthode de dosage de la fraction libre des médicaments relève d’une certaine complexité en comparaison du dosage de la fraction totale. La liaison protéine-médicament est influencée par certains paramètres comme le pH, la! température ou encore la composition de la matrice plasmatique. A cela s’ajoute d’autres problématiques comme la fixation protéique concentration dépendante, la fixation non spécifiques aux supports et le manque de stabilité de certains analytes qui peuvent complexifier davantage la mise au point et le dosage de la fraction libre. Etant donné la nature des molécules à doser et de la différence de composition entre blancs de plasma et matrice de la population cible, la méthode a été validée en chargeant les calibrants après l’étape de récupération de la fraction libre dans un diffusat issu d’un pool de plasma de donneurs sains. Ainsi, le rendement de l’ultrafiltration a été évalué afin de déterminer un facteur de correction pour chaque molécule et destiné à être appliqué aux résultats des dosages des patients. La méthode de dosage, validée selon les recommandations de l’agence européenne du médicament comportera une première étape d’ultrafiltration suivi d’une étape d’extraction en phase solide liquide et enfin une étape de séparation et de quantification par HPLC-UV.