Mise en place de la quantification de la mutation NPM1 de type a au CHU de La Réunion. Évaluation du kit Ipsogen® NPM1 mutA mutaQuant. - DUMAS - Dépôt Universitaire de Mémoires Après Soutenance Accéder directement au contenu
Mémoires Année : 2021

Implementation of the quantification of the NPM1 type a mutation at the CHU Reunion. Evaluation of the Ipsogen® NPM1 mutA mutaQuant kit

Mise en place de la quantification de la mutation NPM1 de type a au CHU de La Réunion. Évaluation du kit Ipsogen® NPM1 mutA mutaQuant.

Résumé

Introduction : Mutation of the Nucleoplasmin (NPM1) gene represents one of the most frequently observed acquired mutations in acute myeloid leukemia (AML) (30%), particularly in AML with normal karyotype. Among the many types of NPM1 mutants, the type A mutation is the most frequent and accounts for 80% of mutants. The 2016 update of the WHO classification of hematologic malignancies made it a separate entity, classified as AML with recurrent genetic abnormalities, based on its clinical, biological, and prognostic features. Quantification of the NPM1 mutation constitutes a robust molecular target for MRD (Measurable Residual Disease), which is now an indispensable tool to guide the therapeutic attitude and to detect early relapses during the follow-up. The reference technique for the quantification of NPM1 mutations is RT-qPCR on complementary DNA. At CHU Sud Réunion, among the one hundred and thirty-three AMLs diagnosed between January 2015 and July 2020, twenty are NPM1 AMLs (15%) and seventeen are NPM1 type A mutations (85%). The quantification of NPM1 type A AMLs, currently outsourced in metropolitan France to the Cochin Hospital in Paris, represents a significant activity. This justifies its implementation in Reunion Island, and would thus allow to obtain shorter delays for results and to optimize the follow-up of patients. Method : This work evaluates the feasibility of the implementation of the quantification of the NPM1 type A mutation at the University Hospital of La Réunion by using the Ipsogen® NPM1 MutA MutaQuant kit (QIAGEN) on the laboratory's qPCR apparatus (LightCycler® 480 from Roche Diagnostics). Three axes of work were carried out: the analytical validation of the RT-qPCR, the resumption of the molecular follow-up of three patients for comparison with our reference center and the evaluation of the performances of the commercial kit in the working conditions of our molecular biology laboratory. Results : Our manipulations validated the analytical validation criteria of RT-qPCR. The molecular follow-up of the three patients is consistent with the data from our reference center. Accuracy evaluation, through External Quality Assessments (EQA) in which 23 laboratories in France participate, shows discordant results with the peer group. Conclusion : The implementation of NPM1 type A mutation quantification by Ipsogen's NPM1 MutA Mutaquant kit is feasible at CHU Sud Réunion under the current conditions. However, additional studies are necessary to explain the non-conformity of our EEQs and to meet the COFRAC accreditation requirements.
Introduction : La mutation du gène NPM1 (Nucleoplasmine) représente l’une des mutations acquises les plus fréquemment observées dans les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) (30%), en particulier au sein des LAM à caryotype normal. Parmi les nombreux types de mutants NPM1, la mutation de type A est la plus fréquente et représente 80% des mutants. La mise à jour 2016 de la classification OMS des hémopathies malignes en a fait une entité à part entière, classée parmi les LAM avec anomalies génétiques récurrentes, de par ses caractéristiques cliniques, biologiques et pronostiques. La quantification de la mutation NPM1 constitue une cible moléculaire robuste pour la MRD (Measurable Résidual Disease), outil désormais indispensable pour guider l’attitude thérapeutique et détecter précocement les rechutes au cours du suivi. La technique de référence pour la quantification des mutations NPM1 est la RT-qPCR sur ADN complémentaire. Au CHU sud Réunion, parmi les cent trente-trois LAM diagnostiquées entre janvier 2015 et juillet 2020, vingt sont des LAM NPM1 (15%) et dix-sept sont des mutations NPM1 de type A (85%). La quantification des LAM NPM1 de type A, actuellement externalisé en métropole à l’hôpital Cochin à Paris, représente une activité significative. Ceci justifie sa mise en place à La Réunion, et permettrait ainsi d’obtenir des délais de rendu de résultats plus courts et optimiser le suivi des patients. Méthode : ce travail évalue la faisabilité de la mise en place de la quantification de la mutation NPM1 de type A au CHU de La Réunion par l’utilisation du kit Ipsogen® NPM1 MutA MutaQuant (QIAGEN) sur l’appareil de qPCR du laboratoire (LightCycler® 480 de Roche Diagnostics). Trois axes de travail ont été menés : la validation analytique de la RT-qPCR, la reprise du suivi moléculaire de trois patients pour comparaison avec notre centre de référence et l’évaluation des performances du kit commercial dans les conditions de travail de notre laboratoire de biologie moléculaire. Résultats : Nos manipulations ont validé les critères de validation analytique de la RT-qPCR. Le suivi moléculaire des trois patients est concordant avec les données de notre centre de référence. L’évaluation de l’exactitude, par l’intermédiaire des Evaluations Externes de Qualité (EEQ) auxquelles participent 23 laboratoires en France, montre des résultats discordants avec le groupe de pairs. Conclusion : La mise en place de la quantification de la mutation NPM1 de type A par le kit NPM1 MutA Mutaquant d’Ipsogen est faisable au CHU Sud Réunion dans les conditions actuelles. Cependant, des études supplémentaires sont nécessaires pour expliquer la non-conformité de nos EEQ et satisfaire aux exigences d’accréditation du COFRAC.

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dumas-03543406 , version 1 (26-01-2022)

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  • HAL Id : dumas-03543406 , version 1

Citer

Pierre-Louis Prairat. Mise en place de la quantification de la mutation NPM1 de type a au CHU de La Réunion. Évaluation du kit Ipsogen® NPM1 mutA mutaQuant.. Sciences du Vivant [q-bio]. 2021. ⟨dumas-03543406⟩
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