Detecting autoreactive T cells in type 1 diabetes using the cytokine ELISPOT assay
Quantification des lymphocytes T autoréactifs circulants au cours du diabète insulino-dépendant
Résumé
The ability to reliably detect autoreactive T cells in type 1 diabetes still constitutes a major challenge. In fact, relevant biological markers are still crucially needed in order to better assess immunotherapies, but also to improve prediction of type 1 diabetes in patients flagged as being at risk for the disease. Most existing studies in the field have been conducted so far in the adult population on the basis of the knowledge of HLA-restricted immunodominant epitopes targeted by T cells. The ELISPOT assay evaluated in this study was performed in a paediatric population, at the time of type 1 diabetes diagnosis. Autoantigens used for autoreactive T cell enumeration awere overlapping peptide pools (commercial pools for GAD, IA2 and insulin; custom peptide library for ZnT8), which made it possible to test all included children, independently of HLA restriction. Low frequencies of GAD-, IA2- and insulin-specific T cells were identified, as previously reported by others. By contrast, both frequencies of ZnT8-specific T cells and ZnT8 antibody titer were clearly lower than what has been described, which could be due to a statistical bias, linked to the small size of our sample. Using overlapping peptide pools, rather than HLA restricted epitopes, does not seem to improve the detection of autoreactive T cells. The frequency of these autoreactive T cells appears low, as well as the number of positive patients. The ELISPOT assay, which is basically technically mature, could however be improved based on the recent identification of immunogenic hybrid fusion peptides both in the NOD mouse model of type 1 diabetes and in diabetic patients.
La détection fiable des lymphocytes T autoréactifs circulants chez les patients diabétiques reste un défi majeur d’actualité, pour fournir un marqueur immunologique utile à une meilleure évaluation des thérapies d’immuno-intervention chez les patients diabétiques, mais également à l’établissement de profils de réactivité d’intérêt diagnostique chez les patients à risque de développer un diabète de type 1. La plupart des études décrites dans la littérature concernent une population adulte et se basent sur l’utilisation de peptides immuno-dominants choisis, restreignant les tests à certains patients. Le test ELISPOT est réalisé chez des enfants diabétiques de type 1, au moment du diagnostic. Les antigènes utilisés sont des pools de peptides chevauchants (commerciaux pour GAD, IA2 et insuline ; produit à façon pour ZnT8) permettant de tester tous les enfants, et ce sans restriction HLA. Les résultats sont assez proches de ceux de la littérature concernant les réactivités anti-GAD, IA2 et insuline, avec des réponses faibles en fréquence. En revanche, la réactivité anti-ZnT8 est nettement inférieure à ce qui est habituellement décrit, tout comme la positivité des autoanticorps anti-ZnT8 ; ce qui peut être lié à un biais statistique dû au faible effectif de notre population. L’utilisation des pools de peptides ne montre pas de supériorité par rapport à celle de peptides restreints. Elle ne permet pas l’obtention de meilleures réponses, à la fois en termes de fréquence et de nombre de patients positifs. L’amélioration du test de l’ELISPOT, bien que mature techniquement, passerait par l’identification et l’utilisation de peptides hybrides, plus proches des épitopes actifs in vivo.
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