Le thiouracile (2-TU), principal antithyroïdien de synthèse (ATS), fut l’objet d’utilisations illégales en élevage dans le but d’augmenter la croissance des animaux de production. Les ATS sont interdits d’usage au sein de l’Union Européenne depuis 1981. La possible présence endogène de thiouracile dans l’urine des animaux de production rend difficile la déclaration de conformité d’un échantillon. La recherche de biomarqueurs spécifiques de l’usage frauduleux du thiouracile est donc cruciale. Notre étude vise à évaluer la pertinence du 6-MTU comme marqueur diagnostique de l’usage de 2-TU chez les ovins. Les cinétiques d’élimination urinaire de 2-TU, 4-TU, 5-MTU et 6-MTU chez deux ovins traités avec 2 et 0,2 g/100 kg de PV de thiouracile par voie orale ont été étudiées par LC-MS/MS. Du 6-MTU a été détecté dans l’urine des brebis traitées 8 h après la première administration et jusqu’à 48 h post-administration. L’étude rétrospective de 200 échantillons d’urine d’ovins provenant de plans de surveillance a démontré l’absence de 6-MTU dans l’urine physiologique d’ovin. Cette étude confirme l’intérêt du 6-MTU comme biomarqueur discriminant une administration de thiouracile chez les ovins.